尊龙凯时细胞培养说明书

一、细胞培养条件

细胞名称：生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% P/S + 1% 丙酮酸钠 + 1% L-谷氨酰胺

传代方法：首轮建议 1:2 的传代比例，传代情况：每2天换液。

备注：请用无菌离心管收集瓶内培养基，留作对比培养。如果对比培养效果不佳，建议直接购买尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞收到后处理

在细胞达到良好状态后，应将培养瓶灌满完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方法。收到细胞后，请用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，随后在超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，使细胞状态稳定后再进行后续处理。请用显微镜观察细胞的生长情况，并不同倍数拍照保存（最好至少保留40x、100x、200x下各一张）。前三天的照片是重要的售后依据，不提供照片的情况下将默认状态良好。

在传代后，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基，以便进行对比培养。在换液后，记得松开瓶盖以便细胞呼吸。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果细胞未达到80%汇合度，将培养瓶中的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基于37℃、5% CO2的孵箱中培养。如果细胞密度超过80%，则可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，显微镜下观察细胞消化情况。如绝大多数细胞变圆并脱落，迅速取回操作台，轻敲培养瓶后加入至少5ml完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，将悬液转移至离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例将细胞悬液分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖T25培养瓶的80%时，弃去培养液并用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打以促使细胞脱落，并将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，向细胞沉淀中加入1ml尊龙凯时的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中，如需转入液氮罐，则需在-80℃保存24小时以上后再转入液氮罐中。

四、细胞复苏

从液氮中取出细胞冻存管（佩戴防护面具），迅速置入37℃的水浴中解冻，直至冻存管内无结晶。随后，用75%的酒精擦拭冻存管外壁，并将冻存管内的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。弃去上清，用5ml完全培养基重悬，并接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。次日，使用新鲜完全培养基继续培养。

五、注意事项

某些细胞可能贴壁不牢，在运输过程中容易脱落，这是正常现象。如果脱落较多，请将所有培养液收集至离心管，收集上清作过渡培养（后期对比培养），沉淀部分可以加入胰酶并放入细胞培养箱中继续培养。

六、售后条款

1. 可重发的情况

1. 细胞在运输途中出现问题，如丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，可以进行重发。
2. 细胞污染问题需在收到产品48小时内反馈真实实验结果，核实后可重发。
3. 常温发货的细胞静置24小时后、干冰发货的细胞解冻后24小时内，若大部分细胞未存活（需提供清晰的细胞状态照片），可重发。
4. 干冰发货的细胞解冻24小时后或常温发货的细胞静置4小时后且未开封，出现污染可重发。
5. 细胞活性问题需在收到产品7天内提供真实实验结果，使用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后可重发。
6. 收到细胞当天及第2、3天请拍照，3天内未反馈情况将视为产品合格。若4-7天内出现问题，需提供收到细胞前3天的照片及详细操作步骤，并与技术人员沟通，由技术人员判定责任并进行重发。

2. 不予重发的情况

1. 客户造成的细胞污染，不重发。
2. 客户不当操作导致细胞状态不良，不重发。
3. 非尊龙凯时推荐的培养体系导致细胞状态不良，不重发。
4. 细胞状态不良且未提供培养前3天照片的，不重发。
5. 细胞在培养过程中经其他处理的，不重发。
6. 收到细胞2天内未及时反馈的，不重发。
7. 具体情况视实际而定。